操作方法:
1、組織總蛋白的提取
在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和PMSF；混勻，放置在冰上備用；
稱(chēng)取0.1g的新鮮組織，放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處，用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎，然后加入0.5-1ml的新配置的裂解液，研磨直至沒(méi)有明顯的組織塊，這個(gè)過(guò)程注意冰上操作；
將組織勻漿液移入1.5ml的EP管中，4 oC 12000g離心30min；
吸取上清至新的管中；
進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。
（提取好的蛋白建議保存于-80 oC，即用即取，避免反復(fù)凍融，避免長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存。)
2、細(xì)胞總蛋白的提取
裂解液的用量：107個(gè)細(xì)胞需要裂解液1ml；
貼壁細(xì)胞：棄去培養(yǎng)基，用冷的PBS洗兩次，棄去PBS，然后加入計(jì)算好的細(xì)胞裂解液；在冰上用細(xì)胞刮刀進(jìn)行刮離細(xì)胞，
將刮離的細(xì)胞裂解液移入EP管中，顛倒裂解20-30min
懸浮細(xì)胞：4 oC 400g離心收集細(xì)胞，用冷的PBS洗兩次細(xì)胞，同樣按細(xì)胞數(shù)加入裂解液，
渦旋10s，放置冰上裂解10min，重復(fù)3-4次；
裂解完畢之后，將細(xì)胞裂解液4 oC 12000g離心30min；
將上清移入新的EP管中；
進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。
（提取好的蛋白建議保存于-80 oC，即用即取，避免反復(fù)凍融，避免長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存。)

注意事項(xiàng)：
實(shí)驗(yàn)過(guò)程，所有試劑都要需要預(yù)冷或者即融，保證操作過(guò)程中的低溫環(huán)境；
PSMF（有毒）現(xiàn)用現(xiàn)加，因?yàn)镻MSF在水溶液中會(huì)快速降解；

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標(biāo)題:miR 199b 5p inhibits triple negative breast cancer cell proliferation, migration and invasion by targeting DDR1

成員:Anhao Wu,Yan Chen,Yang Liu,Yafang Lai,Dequan Liu

論文因子:1.664 發(fā)表期刊:Oncology Letters pmid:30250555

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標(biāo)題:Cysteine protease inhibitor 1 promotes metastasis by mediating an oxidative phosphorylation/MEK/ERK axis in esophageal squamous carcinoma cancer

成員:Zhang Liangming, Chen Xiongfeng, Wang Jianwei, Chen Meihong, Chen Juan, Zhuang Wanzhen, Xia Yu, Huang Zhixin, Zheng Yue, Huang Yi

論文因子:4.6 發(fā)表期刊:Scientific Reports pmid:38424293

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標(biāo)題:The GluN1/GluN2B NMDA receptor and metabotropic glutamate receptor 1 negative allosteric modulator has enhanced neuroprotection in a rat subarachnoid hemorrhage model

成員:Zongyong Zhang a,1 , Junke Liu b,1 , Cundong Fan a

論文因子:4.7 發(fā)表期刊:Experimental Neurology pmid:29258835

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標(biāo)題:Oxidized Low-Density Lipoprotein Induces Apoptosis in Cultured Neonatal Rat Cardiomyocytes by Modulating the TLR4/NF-κB Pathway

成員:Xiantao Wang, Yuhan Sun, Huafeng Yang, Yuanxi Lu ,

論文因子:4.259 發(fā)表期刊:Scientific Reports 6, Article number: 27866 (2016) pmid:27279424

注意：以上文獻(xiàn) 僅供參考

全蛋白提取試劑盒(強(qiáng))

全蛋白提取試劑盒(強(qiáng))